乙酰氨基阿维菌素缓释注射剂质量研究与血清含量测定方法的建立

 建立了 HPLC 法用于测定 EPR 缓释注射剂的含量与有关物质，经过验证后证明，该方法具有较高的专属性，加样回收率、稳定性、精密度、耐用性等验证项目均较高，可以同时准确地检测 EPR 缓释注射剂的含量与有关物质。经检测，3 批 EPR 缓释注射剂样品的含量与有关物质结果符合要求。
第一章 绪论

  仿制药（Generic drug，GD）是指在国内外保护期满后，仿制原研药获得的药品，原研药（Reference listed drug，RLD）的有效成分、规格、剂型、给药途径、适应症与仿制药相同，且相对于原研药而言，仿制药具有明显的价格优势（胡林峰 等，2016）。使用仿制药已被认为是控制不断上涨的处方药成本的重要且有效的工具（MISHUK, A U et al., 2018）。因此仿制药的健康发展，对于国家经济发展、减少经济支出和药企的发展都是有益的。我国仿制药行业规模虽然越来越大，然而，仿制药的质量和临床疗效评价一直存在争议，任何企业研发的仿制药，必须要获得监管部门的批准，证明其与相应参考产品的生物等效性（Bioequivalence，BE），这是任何仿制药上市批准的先决条件（CESSAK, G et al., 2016）。为了使我国仿制药的研发、生产、监管、临床应用有一定水平的提升，笔者从仿制药一致性评价（Consistency evalution，CE）概念、核心、政策的内涵、方法、评价标准及可能的缺陷，并就加强对仿制药质量和疗效的管控、确保用药安全，提高国际竞争力，使药品质量早日达到国际先进水平（白雅婷，2019）提出个人见解。

1.1 一致性评价概述

1.1.1 一致性评价概念

  一致性评价，包括药学等效（Pharmaceutical equivalence，PE）和生物等效。美国 FDA（Foodand Drug Administration）颁布的橙皮书中指出：（1）药学等效必须满足以下条件：仿制药与原研药具有相同的活性成分，并且原研药在剂型、剂量、规格、使用途径等方面相同；（2）生物等效

必须满足以下条件：满足药学等效，且治疗与原研药的说明书相同的适应症时具有一样的临床安全性和有效性（UHL, K et al., 2018；DUBEY, R, 2012）。

1.1.2 一致性评价核心

  一致性评价的核心是确保仿制药的治疗效果等同于原研药。目前，我国对于普通口服固体制剂一致性评价的技术策略，主要采用与原研药对比体外溶出释放，计算释放的相似性，在体外相似的前提下，进行体内生物等效试验。见图 1-1（冯毅 等，2016）。

1.2 参比制剂的选择与问题

  参比用制剂应是处方工艺合理，质量稳定，疗效真实的药品。由于参比用制剂是一致性评价的标杆，对评价结果有着至关重要的作用（金方方 等，2018）。当前参比用制剂的遴选为采用原研药，或收载于橙皮书、日本药局方中，以及在国际协调理事会（The International Council，ICH）成员国上市的品种（董双涛 等，2018）。当一个公司希望橙皮书中的一个仿制药也成为参比用制剂，就需要递交一个“citizen petition”申请，申请通过后，该仿制药就可以作为相应种类的第二个参比用制剂，并可被仿制药提交申请时引用（黄海伟 等，2013）。据相关统计，我国目前开展的一致性评价药物品种中，按基本原则能找到参比制剂的品种仅占约 20%~30%左右，并且，部分品种的参比制剂早已因各种原因退市，这些品种的参比制剂如何界定、如何获取更是一个亟待解决的大问题。针对这一问题，药物审批中心组织根据实际，制定并公布了 2020 年《化学药品注射剂仿制药质量和疗效一致性评价技术要求》，要求指出，须按照《化学仿制药参比制剂遴选与确定程序》的具体要求，科学依规选择合适的参比制剂。
第二章 自研与原研 EPR 缓释注射剂质量检测

2.1 材料与方法

2.1.1 试剂

2.2 结果

2.2.1 外观检查结果

取三批自研 EPR 缓释注射剂与原研 EPR 缓释注射剂样品置于无色玻璃瓶中，进行直接外观观察，三批制剂的外观与原研 EPR 缓释注射剂相同，均为微黄色的澄明油状液体。

第三章 EPR 缓释注射剂的含量与有关物质检测......................................................... 17

3.1 材料与方法............................................................................................................... 17

3.2 结果........................................................................................................................... 21

3.3 讨论........................................................................................................................... 28

3.4 小结........................................................................................................................... 28

第四章 自研与原研 EPR 缓释注射剂的药学等效研究................................................ 29

4.1 材料与方法............................................................................................................... 29

4.2 结果........................................................................................................................... 32

4.3 讨论........................................................................................................................... 36

4.4 小结........................................................................................................................... 36

第五章 EPR 缓释注射剂的刺激性研究......................................................................... 38

5.1 材料与方法............................................................................................................... 38

5.2 结果........................................................................................................................... 40

5.3 讨论........................................................................................................................... 46

5.4 小结........................................................................................................................... 46

第六章 牛血清中 EPR 检测方法的建立........................................................................ 47

6.1 材料与方法............................................................................................................... 47

6.2 结果........................................................................................................................... 50

6.3 讨论........................................................................................................................... 56

6.4 小结........................................................................................................................... 57

第七章 结论

1. 自研 EPR 缓释注射剂各项检查结果与原研 EPR 缓释注射剂相近。

2. 建立了 HPLC 法用于测定 EPR 缓释注射剂的含量与有关物质，经过验证后证明，该方法具有较高的专属性，加样回收率、稳定性、精密度、耐用性等验证项目均较高，可以同时准确地检测 EPR 缓释注射剂的含量与有关物质。经检测，3 批 EPR 缓释注射剂样品的含量与有关物质结果符合要求。

3. 建立了 UPLC 法用于检测自研与原研 EPR 缓释注射剂在释放介质中的含量。经过在同一条件释放 31 d 后，自研与原研乙酰氨基阿维菌素缓释注射剂累积释放量均超过到 80%，且自研与原研的相似因子（f2）值大于 50，说明自研与原研 EPR 缓释注射剂具有药学等效性。

4. 自研 EPR 缓释注射剂皮下注射与肌肉注射对组织损伤结果表明，EPR 缓释注射剂适用于采用皮下注射的给药方式，而不可采用肌肉注射。

5. 建立 HPLC-FLD 法用于检测牛血清中 EPR 的含量，并进行方法学验证。经过验证，该方法特异性强，回收率高，各种条件下的稳定性较高，可以准确地进行牛血清中 EPR 定量检测。